بروتين الفلورسنت الأخضر (gfp) هو نوع من بروتينات التلألؤ البيولوجي ، وجدت في coelenterates. من السهل الكشف عن gfp ، حساسية عالية ، خصائص مضان مستقرة ، تسامح قوي ، سهل للتعبير ، بدون تسمم للخلايا ، تستخدم لكشف الخلايا الحية. لذلك ، يمكن استخدام gfp كجين مراسل للكشف عن التعبير الجيني أو التنظيم ، أو كعلامة انصهار للكشف عن التوطين ، والهجرة ، وتغيير التشكل ، والتفاعل بين الجزيئات لجزيء البروتين ، أو علامة مستهدفة بعض العضيات. الحد الأقصى لذروة الامتصاص gfp هو 395nm (uv) ، ومع ذروة امتصاص نائب 470nm (أشعة زرقاء). الحد الأقصى لذرّة طيف الانبعاث هو 509 نانومتر (الشعاع الأخضر) ، ومع ذروة 540 نانومتر (شوردر). 450nm-490nm فقط هو ذروة نائب امتصاص GFP ، ولكن لأن ضوء الإثارة لا تضر الخلايا ، وعادة ما تستخدم الفرقة بشكل أكثر تواترا (أساسا 488nm). بالإضافة إلى ذلك ، فإن خصائص الطيف من gfp تشبه fluorcein isothiocyanate (fitc) ، وكلاهما يحتوي على مجموعة من المرشحات. gfp مضان مستقر للغاية. تحت ضوء الإثارة ، فإن قدرة تبيض الصورة gfp أقوى من الفلوريسين. على وجه الخصوص ، هو أكثر استقرارا في موجة الأشعة الزرقاء من 450nm-490nm. وبالمثل ، فإن حساسية مضان من البروتين الانصهار gfp أعلى من الأجسام المضادة الفلورسنت من العلامات fluorochrome ، هو قدرة قوية تبييض المضادة للضوء ، وهو أكثر ملاءمة لتحديد الكمي والتحليل. جيل من gfp مضان لا تحتاج إلى أي ركيزة خارجية رد فعل. لذلك ، GFP باعتبارها بروتين مراسل حية مطبقة على نطاق واسع ، تأثيره لا مثيل له من قبل أي بروتين مراسل الانزيم. ومع ذلك ، gfp ليس الإنزيم. إشارة مضان لا يوجد لديه تأثير التضخيم الأنزيمي. لذلك ، قد تكون حساسية gfp أقل من بروتين مراسل الإنزيم ، مثل luciferase يراعة.

طرق مراقبة gfp:

1.portable مصدر الضوء الإثارة gfp

استخدام مصدر ضوء الإثارة GFP المحمولة هو الأسلوب الأكثر ملاءمة وأسرع الرصد (يسمى مرآة بروتين فلوري مراقبة). لأن gfp لديه ذروة امتصاص أعلى على 470nm ، باستخدام مصدر الضوء الإثارة 470nm يمكن أن يحفز gfp لينبعث مضان أخضر ساطع. يجب علينا ارتداء زجاج المراقبة المهنية لمراقبة إشارة مضان واضح عندما نلاحظ gfp مضان . السبب هو ضوء الإثارة هو الضوء الأزرق الشديد.

2.uv مصدر الضوء

باستخدام الأشعة فوق البنفسجية مصدر الضوء (دعا مصباح الأشعة فوق البنفسجية الملاحظة ، ضوء أسود مصباح) الملاحظة هي أيضا مريحة للغاية. ولكن إذا لاحظت النبات ، فإن اللون الأخضر المورق من أوراق النباتات يفلور أيضًا تحت ضوء الأشعة فوق البنفسجية. انها ستتدخل ل gfp مضان . علاوة على ذلك ، قد تتسبب العينات أيضًا في تلف عينات gfp تحت ضوء الأشعة فوق البنفسجية.

3. المجهر تألق

ويستند المجهر مضان على الأشعة فوق البنفسجية كمصدر للضوء ، ويستخدم لإشعاع الكائن المكتشفة ، يجعله يتألق ، ثم يلاحظ شكل وموقع الكائن تحت المجهر. يستخدم المجهر مضان للبحث في امتصاص المواد داخل الخلايا ، والنقل ، وتوزيع وموقع المواد الكيميائية. بعض المواد في الخلية ، مثل الأخضر المورق ، يمكن أن يتألق بعد إشعاع الضوء فوق البنفسجي. مواد أخرى ، لا تتألق في حد ذاتها ، ولكن إذا كنت صبغ مع صبغة الفلورسنت أو الأجسام المضادة الفلورسنت ، يمكن أن يتألق أيضا عن طريق الأشعة فوق البنفسجية. المجهر مضان واحدة من أدوات للبحث النوعي والكمي على هذه المواد. في الوقت الحاضر ، فإن الطريقة الشعبية تستخدم مراقبة المجهر مضان. المجهر مضان تحظى بشعبية كبيرة في المختبر. لكن العيب الوحيد هو أن شرائح الأوراق أو الحيوان يجب أن يتم جمعها للملاحظة ، والتي ستدمر العينات المستزرعة ولا يمكن رصدها.

تحليل شامل ، هو الطريقة الأكثر سريعة وملائمة لمراقبة gfp من خلال اعتماد مصدر الضوء الإثارة gfp المحمولة (دعا bios-cope transgenic).